化學實驗室檢測方法的驗證與確認的參數
2018-07-26
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檢測方法的驗證與確認的參數
化學檢測的對象即分析的目標化合物按照性質可以分為不得檢出的物質 (禁用物質) 、限制使用的物質 (已制定最高允許殘留限量物質) 和無限制使用物質這三類。因此, 在對化學檢測方法進行驗證和確認過程中制訂相關技術指標的試驗方案及結果評價時, 也應充分考慮這三類物質的不同特性來控制執行。國際部分技術組織針對化學檢測實驗室的方法驗證與確認都提出了相關的技術要求, GB/T27404-2008標準等文件也給出方法確認與驗證可參考的技術參數。從方法驗證與確認參數的科學性和有效性論證角度看, 化學檢測方法驗證的技術指標可分為方法的校準曲線、回收率、精密度、準確度 (正確度) 試驗。而非標方法的確認技術指標除了方法的校準曲線、回收率、精密度、準確度 (正確度) 試驗以外, 還需要進行方法的特異性、耐用性和測量不確定度評估等確認。
1 方法的校準曲線
實驗室認可的實驗室應確定檢測方法校準曲線的數學方程以及校準曲線的工作范圍, 濃度范圍盡可能覆蓋一個數量級, 至少作5個點 (不包括空白) 。對于篩選方法 (即指定性方法或半定量方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.98, 對于確證方法 (即能準確定量的方法) , 方法線性回歸方程的相關系數不應低于0.99。測試溶液中被測組分濃度必須在校準曲線的線性范圍內。
2 方法的回收率
方法的回收率代表了測試人員操作檢測過程所獲得測試結果的準確性。考慮到被測物的濃度水平會影響到回收率試驗結果的高低, 因此, 在進行方法的回收率驗證試驗時, 對于禁用物質, 回收率應在方法測定低限 (LOD) 、兩倍方法測定低限和十倍方法測定低限進行三水平試驗;對已制定最高殘留限量MRL的最大化學殘留量, 回收率應在方法LOD、MRL、選一合適點進行三水平試驗;對于未制定MRL的, 回收率應在方法LOD、常見限量指標、選一合適點進行三水平試驗。每一水平做雙平行。可參考表1給出的數據進行回收率結果的評價。
表1.回收率可接受范圍
3 方法的精密度
方法的精密度代表了測試人員操作檢測過程所獲得測試結果的穩定水平。在進行方法的精密度驗證試驗時, 對于禁用物質, 精密度試驗應在LOD、兩倍LOD和十倍LOD三個水平進行;對于已制定MRL的, 精密度試驗應在LOD、MRL、選一合適點三個水平進行;對于未制定MRL的, 精密度試驗應在LOD、常見限量指標、選一合適點三個水平進行。每一濃度水平的重復測定次數>6。精密度測試的結果可通過實驗室內的變異系數 (CV=標準偏差/平均值) 來表達, 標準偏差s可通過貝塞爾Bessel公式計算得到, 并可參考表2給出的數據進行精密度結果的評價。
表2.實驗室內變異系數
4 方法的準確度
方法的準確度又可稱為方法的正確度, 指的是重復分析標準物質 (實物標樣) 或水平測試樣品, 測定的含量經回收率校正后, 得出測定值與真值的偏差范圍。可參考表3給出的數據進行準確度結果的評價。
表3.實驗室內變異系數
5 方法的特異性
實驗室在使用非標方法、實驗室設計 (制定) 的方法、超出其預定范圍使用的標準方法、擴充和修改過的標準方法時, 有必要對使用方法的特異性進行確認, 因為僅僅基于色譜分析的技術手段不能準確地區分同一分子量的物質 (同分異構體) 。對于能夠準確定量檢測的方法要保證檢測的結果準確性, 避免異構體結果的誤判, 因此就應該根據待測物的化學結構信息、使用分子光譜等技術才能滿足方法的特異性。方法的特異性確認可采用如下的技術手段:
1) 氣相色譜分析結果再用氣相色譜質譜分析技術確證;
2) 液相色譜分析結果再用液相色譜質譜分析技術確證;
3) 免疫親和色譜分析結果再用氣相色譜質譜分析技術確證;
4) 氣相色譜分析結果再用紅外光譜分析技術確證;
5) 液相色譜分析結果再用免疫層析分析技術確證。
6 方法的抗干擾性和耐用性
實驗室采用的非標方法應具有對測試過程中可影響測試結果因素的抗干擾能力, 當測試條件發生細小變動時, 方法可具有一定的保持測試結果不受影響的耐受程度, 方法的技術條件應滿足最大的波動影響, 并且設備、試劑、操作過程等應具有盡可能廣泛的適用性和耐用性, 不宜具有嚴苛的要求。
實驗室只有做好方法驗證和方法確認, 才能用測試數據真實地證明實驗室使用標準方法的操作能力, 證明所使用的非標方法具有的科學性、適用性、準確性和有效性, 達到確保實驗室檢測結果準確無誤的目的。
